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自1986年首个单克隆抗体被批准以来，抗体工程已经走过了三十多年的历程。在此期间，重大的技术进步使抗体治疗药物的发现和开发变得更快、更高效。抗体药物由于特异性强，不良反应越来越少。因此，治疗性抗体已成为近年来开发的最主要的一类新药。

在临床使用的所有抗体药物有人源抗体、人源化抗体、嵌合抗体和小鼠抗体，其中人源抗体和人源化抗体是治疗性抗体领域的主要模式。本文将概述用于开发治疗性抗体药物的抗体工程和技术平台，包括噬菌体展示、转基因小鼠和单B细胞抗体技术。介绍如何使用亲和力成熟法优化抗体结合活性。

治疗性抗体的开发方法概览

获得诺贝尔奖的人源化技术：噬菌体展示

噬菌体展示是应用最广泛的体外抗体筛选技术。它利用DNA重组技术将外来多肽与噬菌体M13的外壳蛋白（pIII）融合，从而将多肽显示在噬菌体表面。这种方法可从108倍过量的噬菌体池中亲和性选择抗原特异性噬菌体抗体。噬菌体展示技术的大致流程有：构建抗体-文库；抗体库迭代筛选；亲和力筛选。

噬菌体展示法因其易于筛选高亲和力抗体和高通量应用而被广泛用于抗体的亲和力成熟。

获得全人源抗体的另一种技术：转基因动物 

转基因动物具有无需人源化、多样性更强、体内亲和力成熟和克隆分离抗体优化等优点。但由于人类Ig基因座的巨大体积，以及需要进行多种重排，并大量使用人类的V、D和J片段。为了克服这些挑战，需要进行大量的工作，采用不同的策略来产生表达人类抗体序列的动物模型。

快速高效的筛选技术：单B细胞技术

单B细胞抗体技术的主要优点是只需要几个细胞，就能高效、快速地分离出潜在的mAbs，有利于在传染病等紧急情况下快速开发相关疫苗。此外，单B细胞克隆保留了生物介导的重链和轻链配对，在哺乳动物细胞系中克隆和表达这些基因，以立即生成重组抗体，因此已成为一种越来越有吸引力的方法。

目前，噬菌体展示、转基因小鼠和单B细胞抗体技术已被证明是产生人类抗体的可靠方法。

帝肯TECAN抗体药物筛选技术与高通量方法

1.噬菌体展示技术平台

噬菌体展示技术能在短短几周内分离出单克隆抗体，远远快于传统的杂交瘤方法。该方法通常基于磁珠法，一次使用数十块96孔板进行淘洗，快速筛选出特异性全人源化抗体片段。

● 方案特性

❖自动化：从panning、克隆挑选到抗体亲和力验证的整个流程自动化运行

❖多功能：灵活8通道机械臂不仅可进行稀释、菌落涂布和克隆挑选，实现多种功能与应用

❖高效率：每小时可挑选1000个克隆，大幅度节省时间，减少人力成本

❖易整合：方便整合核酸提取仪、酶标仪、洗板机等设备模块

2.单B细胞筛选技术

Tecan单B细胞筛选平台支持B细胞“复制”法，离心并通过Uno单细胞分液仪分选单B细胞，快速分离抗体可变区编码基因，构建自然配对的VH-VL库，并导入细胞进行表达，筛选特异性抗体。

单B细胞快速分液仪—Uno

TecanUno单细胞分液仪支持广泛的单细胞应用，包括细胞系开发、单细胞分析等。Uno能够进行精准的单细胞分液并保证细胞活性，同时还能实现从皮升到微升级别的试剂的快速分配。

优势特性

❖紧凑设计，直观简约的软件，简单且易于使用

❖快速分细胞到384孔板

❖可靠的分选过程实现可重复的结果

❖温和的单细胞分选保持细胞完整性和90%细胞活力

3.杂交瘤细胞培养与筛选平台

Tecan自动化杂交瘤筛选工作站，不仅可自动化处理细胞的多倍稀释，细胞接种、换液等培养操作，实现细胞转染、计数以及活性分析；还可选配整合酶标仪、洗板机，实现分泌特定单克隆抗体的杂交瘤细胞的筛选和确认。

4. 单B细胞分离或抗体亲和力筛选平台

流式细胞术可将单B细胞从PBMC或淋巴组织中分离出来，也是抗体亲和力筛选或中和抗体筛选使用的方法之一。

Tecan自动化流式样本前处理系统，整合离心机，从操作步骤的角度可以实现完全平行的人机转移。样本类型涵盖血液、骨髓、组织、细胞及微球等常见流式样本，可以进行全流程自动化的胞外、胞内和核内 4℃ 染色及洗涤，通量可达1-4块96孔板。